Celetrix电转仪（细胞电穿孔仪）    

1500A-EX电转仪，最大转染体积1000uL.

电转染，最关心的是什么？

1.转染效率

2.细胞死亡率

对一批同样的细胞，性质相似，为什么有的细胞顺利转入了 DNA, 有的细胞没有得到DNA.，有的细胞电转后活的好好的，有的就被‘电死’了。

从电转仪的角度来讲，

如果电转染时候每个细胞受到的电压相同，电击时间相同，毫无疑问，通过调节电击电压，电击时间，可以得到一个较高的转染效率和较低的细胞死亡率。

问题是，传统的电击杯，宏观上可以控制电转仪每次电击时间和电压相同，但微观上，电击杯里面不同位置的细胞分到的电压相同吗。

答案是否定的。且将电击杯里的小世界放大了分析。

1.电击杯液面部分

 电极杯内由于液体表面张力的作用，液面不平，导致对液体内部电压分配的均匀度有很大的影响。电压分配可以用一个简化的等效电路来说明。电极杯内液体可以分割成相同的部分，每个部分电阻相同多路先串联再并联，每一路两端总电压相等。

液面翘角处，相当于电阻先并联后再串联入电路，此处阻值变小，在电路中分压变小（如右图 ），细胞电压不够不能电转。由于两端总电压相同，多出来的电压分到液体凹面下方的区间，导致此处电压过高（如右图），细胞死亡。

结论：电极杯里靠近液面的部分细胞分配到的电压相差较大。

2.靠近电极部分

电极杯中样品与电极接触面积大，电化学反应产生毒性物质多，并且产生非常多的气泡。气泡对电转的实际影响非常大。

由于气泡是绝缘体，电流只能从气泡之间的间隙溶液流过，这样导致气泡间隙的溶液中电流富集升高，处于其中的细胞因承受太高的电压而死亡。气泡作为一个球形绝缘体，可以扭曲周围电流的走向。气泡侧面（气泡间隙溶液）电流变大，而气泡的前后两方都是低电流区，处于此区的细胞得到电压不够，不能电转。见右图。

小结：

电极杯内的溶液上方受到液面效应 影响，电场不均匀。靠近两个电极1-2mm的区域由于气泡的作用，电场也不均匀。电极杯内电场比较均匀的较优电转区域很小（右图蓝色部分），而1mm或者2mm电极杯甚至可能没有较优电转区域。

Celetrix电转仪如何避免以上问题

1.Celetrix工作时电转管时密闭的，充满了电转液和电转样品，没有液面效应

2.Celetrix工作时电转管是加压的，产生的气体被压缩溶于液体，而且相比于电击杯，Celetrix工作时电转管与液体接触面积很小。几乎避免了气泡效应。

再加上Celetrix电转仪本身独特的设计（已经获得中国，美国，欧盟，日本等国家和地区的专利）。

Celetrix 电转仪一次可以电转从20uL到200uL不等的样品，适应不同实验需要。

Celetrix积累了多种血细胞，纤维细胞，上皮细胞，肾细胞，神经细胞等电转难易程度不一的各类细胞的优化电转参数，用户只需根据我们的参数稍作实验便可得到适合自己的参数。对于罕见的细胞类型，Celetrix实验室可以协助用户获取最优电转参数。

Celetrix可以承诺同一实验室的同一类细胞，可以做到同类产品中转染率最高，细胞死亡率最低。

公司在上海备有样机。

电转举例

1.T细胞的高效转染

传统的转染方法对于T细胞非常困难，特别是对于质粒的转染。

Celetrix新一代电转技术可以高效转染从新鲜PBMC到刺激培养阶段的T细胞。与其他电转技术相比，Celetrix电转技术具有最高的效率。同时，我们的技术也具有最高的细胞存活率，使得CAR-T，TCR-T制备、CRISPR介导的基因下调等变得容易。

所示图片摄自长期培养的电转后T细胞。T细胞在电转后可以聚集生长，并且GFP表达可以维持很长时间。

2.Ipsc干细胞高效电转

人类的iPSC电转比较困难，一是达到高效率不容易，二是维持iPSC的未分化状态不容易。    

Celetrix新一代电转技术可以用于电转人的iPSC，比如ACS-1030（ATCC）。电转效率保守估计可以达到73%以上，同时细胞存活率非常高，大部分细胞都存活很好。     

ACS-1030 transfection with GFP plasmid after 24 hours

survival>85%

GFP%>73.7%

 24h

电转3天后，iPSC已经自发形成团块生长的典型未分化状态，与未电转的细胞看不出区别。同时，使用Celetrix电转技术，营养细胞层也不是必须的，给实验带来了极大的方便。

72h

3.mRNA超高效电转

有一些实验方法需要转染mRNA。Celetrix新一代电转技术也可以电转mRNA。

mRNA电转的效率一般比质粒高。比如GFP的mRNA电转到Jurkat可以达到97.5%的超高效率。

 mRNA表达的均匀度比质粒要高，总体来说mRNA表达的蛋白在各个细胞中比较均衡。

  mRNA的蛋白表达量一般不如强表达的质粒，因此要达到较高的表达水平以及较长的表达持续时间，使用Celetrix的电转技术就非常有必要。

  siRNA电转比mRNA更加容易。一般来说siRNA电转本身可以达到接近100%的效率，但是蛋白水平的下调是由siRNA的性质决定的。