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为食品加工工艺和防腐的需要，以及为了改善食品品质和色、味、香，在食品生产加工过程中，食品中通常会加入少量的天然或者化学合成的物质。最近几年，由于食品安全问题层出不穷，人们越来越重视食品添加剂所带来的安全隐患。
杭州赛析科技参考国标（GB/T 23495-2009），利用全新高性能的501高效液相色谱仪，经实践检测可提供苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于食品中苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的测定，仅供广大用户参考。
以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
STI501高效液相色谱仪，UV501紫外检测器，手动进样阀(7725i)，N2000色谱工作站
Vertex 色谱柱 250mm×4.6mm×5μm；
超声波水浴振荡器；
食品粉碎机；
pH计；
天平：分度值为0.001 mg。
1.2 试剂
甲醇：色谱纯。
乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000 mL，经0.45μm微孔滤膜过滤。
亚铁氰化钾溶液：称取106 g亚铁氰化钾[K3Fe(CN)6•3H2O]加水至1000 mL。
乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2•2H20]溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，加水稀释至l000mL。
氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。
2 色谱条件
色谱柱：Vertex C18柱，250mm x 4.6 mm，5μm；
流动相：甲醇+0.02mol/l乙酸铵溶液(5:95)；
流速：1 mL／min；
进样量：20μL；
检测波长230nm。
注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；混合标准溶液色谱图
3 试样溶液的制备
3.1 含脂肪、蛋白的样品
称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后用转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；
加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，摇匀；
根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；
用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；
吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
3.2 不含脂肪、蛋白的样品
称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；
根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；
用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；
吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；
混合标准溶液色谱图
4 结果分析
4.1 仪器精密度的测定
取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定7次。
表1：精密度的测定结果
序号
|
峰面积/uv.s
|
|||
苯甲酸
|
山梨酸
|
糖精钠
|
安赛蜜
|
|
1
|
1237675
|
1744586
|
768546
|
1000489
|
2
|
1237589
|
1744531
|
768478
|
1000319
|
3
|
1237693
|
1744387
|
768587
|
1000233
|
4
|
1237731
|
1744436
|
768673
|
1000521
|
5
|
1237718
|
1744801
|
768831
|
1000871
|
6
|
1237667
|
1744603
|
768471
|
1000432
|
7
|
1237608
|
1744498
|
768422
|
1000477
|
平均值
|
1237668.7
|
1744548.9
|
768572.6
|
1000477.4
|
S
|
53.2
|
135.2
|
141.3
|
201.6
|
RSD/%
|
0.004
|
0.007
|
0.2
|
0.02
|
分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好，完全可以满足分析测定的要求。
4.2 回收率的测定
分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。
取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml标准溶液，平行测样7次，进行回收率实验。测定结果见表2。
表2：清凉茶的加标测定结果和回收率
序号
|
样品测定值g／mL
|
加标后测定值μg／mL
|
回收率/%
|
|||||||||
苯甲酸
|
山梨酸
|
糖精钠
|
安赛蜜
|
苯甲酸
|
山梨酸
|
糖精钠
|
安赛蜜
|
苯甲酸
|
山梨酸
|
糖精钠
|
安赛蜜
|
|
1
|
13.80
|
---
|
7.00
|
2.40
|
23.76
|
10.21
|
17．43
|
12.73
|
99.6
|
102.1
|
104.3
|
103.3
|
2
|
24.05
|
10.11
|
16.75
|
12.66
|
102.5
|
101.1
|
97.5
|
102.6
|
||||
3
|
23.93
|
9.83
|
16.81
|
12.31
|
101.3
|
98.3
|
98.1
|
99.1
|
||||
4
|
23.84
|
10.31
|
16.93
|
12.24
|
100.4
|
103.1
|
99.3
|
98.4
|
||||
5
|
23.65
|
9．94
|
17．04
|
12.32
|
98.5
|
99.4
|
100.4
|
99.2
|
||||
6
|
24.14
|
10.13
|
17.21
|
12.58
|
103.4
|
101.3
|
102.1
|
101.8
|
||||
7
|
23.72
|
10.19
|
16.97
|
12.44
|
99.2
|
101.9
|
99.7
|
100．4
|
||||
从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为98.3%-103.1%，糖精钠为97.5%-104.3%,安赛蜜为98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近100%，满足日常检测的要求。
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